1、周期短,一般都是控制在25个工作日之内完成。
2、多年病毒包装经验。
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更多 >>首页>实验服务>细胞生物学技术服务>病毒包装服务>慢病毒包装(一)——过表达慢病毒【插入片段小于3Kb】
服务详情
一、服务简介:
1、慢病毒简介:
慢病毒(lentivirus)是一种逆转录病毒,因为其在宿主体内需要很长的一段潜伏期,才导致宿主发病,所以被称之为慢病毒。
2、慢病毒的组成成分:
(1)病毒结构蛋白gag、pol和env:
gag基因编码病毒的核心蛋白如核衣壳蛋白、内膜蛋白和衣壳蛋白;
pol基因编码病毒复制相关的酶;
env基因编码病毒包膜糖蛋白。
(2)病毒调节蛋白rev、tat:
rev主要参与蛋白调节的表达水平,
tat参与蛋白转录的控制,与病毒的长末端重复序列(long terminal repeats, LTRS),
结合后促进病毒的所有基因的转录。
(3)四个辅助蛋白,即vif、vpr、vpu、nef,帮助病毒包装完成。
3、慢病毒载体:
(1)慢病毒载体是以慢病毒为主要骨架,用目的基因取代慢病毒的部分基因组构建而成。
(2)最经典的慢病毒载体是由HIV病毒改造而来。除了HIV病毒系统以外还有猿类免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus, SIV)载体系统、猫免疫缺陷病毒(felines immunodeficiency virus, FIV)载体系统等。
二、载体构建、慢病毒包装和细胞株建立的流程:
1、获取目的基因:
(1)目的基因一般由客户直接提供。
(2)如果目的基因需要构建,载体构建需要单独收费,收费标准请参照载体构建部分。
2、选择合适的载体:
根据客户的要求,选择合适的载体。
3、构建重组载体:
将目的基因插入到载体上。
4、鉴定重组载体:
用测序或荧光定量等方法鉴定重组载体正确。
5、用无内毒素质粒抽提试剂盒提取重组载体:
一定要用低内毒素和无内毒素的提取试剂盒,高内毒素会导致包装失败。
推荐使用的提取试剂盒如下:
6、用重组载体和辅助包装载体转染293FT细胞:
一般使用电转系统,推荐的电转系统有:
7、收集上清液,通过超滤和超速离心纯化病毒:
超滤管推荐以下品牌:
8、使用纯化后的病毒感染293T细胞,通过药物筛选,获得稳定表达的细胞系:
成功案例
送样须知
1、一般需要客户提供包含目的片段的载体构建。
2、不提供目的载体的,载体构建需要单独计费,详细见载体构建部分。
3、本价格为目的片段小于3Kb的报价;3Kb<目的片段<4.5Kb,价格为4600元。目的片段大于4.5Kb,价格另议。
4、实验完成提供1mL的滴度不低于(1E+8TU/ml)的病毒溶液。
5、完成时间一般不超过25个工作日。
6、不包含qPCR验证。
7、提供等量对照病毒,不需要对照病毒的扣减500元(即3500元)。
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