1、效率高;
2、性价比高;
20管仅200元
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更多 >>首页>试剂>分子生物学试剂>分子克隆及其相关>DH5α感受态细胞(20支)
商品优势
1、效率高;
2、性价比高;
20管仅200元
商品详情
1、简要说明:
DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA)减 少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性; lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α菌株的缺 点是生长缓慢,37℃需培12-14小时才能看见克隆;如需加快试 验速度,请选用TG1,Mach1-T1,XL10-Gold等生长速度快的感 受态细胞。
2、转化效率:
检测转化效率约1×109cfu/μg。
3、操作说明:
1)DH5α感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温 片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的 DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰上静置 25分钟。
2)42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,剧烈晃动会降低 转化效率。
3)向离心管加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB), 混匀后37℃200 rpm复苏60分钟。 4)5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬 菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5)将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选 操作,将平板放37℃培养至少17h。
4、注意事项:
1)感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟 即可融化,融化后6分钟内加入质粒,否则会影响转化效率。
2)混入质粒或连接产物时应轻柔操作,动作过于剧烈影响转化效率!
3)转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。转化成功菌落太多不利于挑取单菌落。
4)挑取单菌落用试管摇菌时,推荐使用旋转培养器。旋转培养器用于试管的摇菌是最合适的!【大肠杆菌的生长速率明显高于用摇床摇菌的效率】
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